Plaque Hybridization
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작성일 23-01-04 00:52
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2. Infection 시키고자... , Plaque Hybridization자연과학레포트 ,
설명
다. Plaque의 크기가 너무 작아도 hybridization signal이 약할 수 있고 너무 커서 인접한 plaque와 완전히 섞여버려도 selection이 어려워진다.
u 90 mm plate일 경우 10,000 pfu, 150 mm plate의 경우 30,000 pfu의 phage를 infection시켜 agar plate에서 배양한 후 screen할 수 있다아 이 이상의 숫자로 infection시킬 경우 screening이 어려워진다.
2. Infection 시키고자 하는 phage의 숫자를 함유하는 희석된 library 용액을 준비한다.
u Phage가 infection되어 형성된 plaque는 약 5시간 이후부터 보이기 처음 한다.
4. 48°C로 온도를 맞춘 10 mM MgSO4가 함유된 LB top agarose를 4 ml 가하고 거품이 생기지 않도록 주의하며 잘 섞은 후 즉시 90 mm LB plate에 부어 고루 퍼지게 한 후 수평판 위에서 약 10분간 방치한다.
1. 15 ml cornical tube에 준비된 phage plating 세포를 200 ml 씩 분주한다.
6. Hybridization에 사용할 nylon membrane을 덮기 위하여 4°C에서 최소한 30분이상 …(투비컨티뉴드 )
1. 15 ml cornical tube에 준비된 phage plating 세포를 200 ml 씩 분주한다. 배양시간은 형성되는 plaque의 상태에 따라 결정하여야 한다. 또한 세포의 양도 150 mm plate의 경우 500 ml를 사용하여야 한다.
5. Plate를 37°C 배양기에서 6시간 내지 10시간 동안 배양한다.
3. Phage plating 세포가 담겨 있는 cornical tube에 100 ml의 phage 용액을 가하고 잘 섞은 후 37°C에서 15분간 방치한다. Infection 시키는 phage 용액은 1x lambda dilution buffer에 희석되어야 하며 용량은 phage plating 세포량의 1/2이 되도록 한다.
2. Infection 시키고자...
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Plaque Hybridization
레포트/자연과학
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1. 15 ml cornical tube에 준비된 phage plating 세포를 200 ml 씩 분주한다. Plaque끼리 서로 인접하여 bacterial lawn이 드문드문 남아 있을 정도로 배양하도록 한다.
